A carcinogênese é processo biológico complexo que envolve proliferação celular, invasão e alterações na adesão, com o citoesqueleto desempenhando papel fundamental na manutenção da forma, polaridade e estabilidade mecânica das células. Entre as proteínas que ancoram elementos do citoesqueleto – como microfilamentos, filamentos intermediários e microtúbulos – às junções celulares, a família das plaquinas emergiu como essencial tanto para a integridade tecidual quanto para a biologia tumoral. Membros dessa família, incluindo desmoplaquina (DSP), envoplaquina (EVPL), periplaquina (PPL), plectina (PLEC) e antígeno‐1 do penfigoide bolhoso (BPAG1), fornecem ligações estruturais entre os filamentos do citoesqueleto e complexos juncionais, como desmossomos e hemidesmossomos.1 Alterações em sua expressão ou localização têm sido associadas a vários tipos de câncer, e algumas plaquinas foram propostas como potenciais biomarcadores. Por exemplo, níveis elevados de autoanticorpos anti‐BPAG1 no soro foram relatados em pacientes com melanoma em comparação com indivíduos saudáveis, embora esses achados não tenham sido replicados de modo consistente em todos os estudos.2,3 Além disso, estudos em câncer de mama mostraram que a diminuição dos níveis de plaquinas acompanha a desorganização precoce do citoesqueleto. Sua expressão reduzida leva ao mau posicionamento do centrossomo e ao enfraquecimento das junções intercelulares – alterações que refletem a perda da polaridade epitelial e são características da transição epitélio‐mesenquimal (TEM).4

A epiplaquina (EPPK1) representa um membro menos caracterizado da família das plaquinas, distinguindo‐se por seu arranjo único de domínios de repetição de plaquina em tandem. Diferente de outras plaquinas, a EPPK1 não apresenta repetições de espectrina e domínio claro de ligação à actina, sugerindo papel estrutural e funcional divergente. Embora seja expressa em múltiplos tecidos epiteliais, sua contribuição para a tumorigênese permanece incompletamente compreendida, e os estudos sobre seu envolvimento no câncer ainda são limitados.1 Os dados do GEPIA2 indicam que os níveis de mRNA de EPPK1 estão reduzidos no melanoma cutâneo, enquanto os conjuntos de dados proteômicos baseados no UALCAN mostram que as alterações no nível da proteína permanecem obscuras.5,6 Dado que os melanócitos e os queratinócitos estão interconectados por meio de junções baseadas em caderina, proteínas plaquinas como a EPPK1 podem contribuir para a estabilização desses complexos de adesão. Esclarecer se a expressão de EPPK1 varia entre lesões cutâneas benignas e malignas pode oferecer valor diagnóstico.7 Apesar dessa relevância potencial, estudos sistemáticos que examinam a expressão de EPPK1 em diversas malignidades cutâneas – como o carcinoma de células escamosas (CCE) e o carcinoma basocelular (CBC) – são atualmente escassos, e seu perfil de expressão em lesões benignas, como nevos intradérmicos, também não foi caracterizado.

Estudos anteriores associaram a EPPK1 ao desenvolvimento de vários tipos de câncer, incluindo carcinomas hepatocelulares, cervicais, colorretais, uroteliais da bexiga e de células escamosas do esôfago.8–12 Dado que as plaquinas contribuem para a ancoragem do citoesqueleto e a estabilidade juncional, a expressão alterada da EPPK1 pode influenciar vias relacionadas à adesão que também se refletem na dinâmica das caderinas. Como o equilíbrio entre E‐caderina e N‐caderina é importante indicador de perda de adesão e potencial invasivo, avaliar sua relação com a expressão da EPPK1 pode ajudar a esclarecer se essa plaquina participa da remodelação da adesão em tumores de pele. O presente estudo visa avaliar a expressão imuno‐histoquímica de EPPK1 juntamente com E‐caderina e N‐caderina em CCE, CBC, nevos intradérmicos e amostras de pele normal. Os níveis de expressão são comparados entre os tipos de lesão, e as correlações com a espessura de Breslow são analisadas para explorar associações com a invasividade tumoral. Amostras de pele normal servem como controles. Os resultados deste estudo podem fornecer novas informações sobre o significado diagnóstico de EPPK1 e sua potencial interação com a adesão mediada por caderina em lesões cutâneas. Além da avaliação imuno‐histoquímica, este estudo também visa investigar a rede de interação molecular das proteínas da família das plaquinas e identificar sua sobreposição com as redes de proteínas associadas ao CCE. Além disso, análises de enriquecimento de GO e KEGG são conduzidas para identificar processos biológicos e vias de sinalização significantemente enriquecidos associados às proteínas sobrepostas.

O citoesqueleto e seus complexos juncionais associados desempenham papel central na manutenção da integridade do tecido epitelial, regulando a adesão celular, a polaridade e a mecanotransdução – processos que são profundamente alterados durante a carcinogênese. As proteínas da família das plaquinas servem como pontes estruturais críticas, ligando os filamentos intermediários aos desmossomos e hemidesmossomos, estabilizando assim a arquitetura epitelial em condições fisiológicas.1 Evidências crescentes indicam que a ruptura da ancoragem citoesquelética mediada por plaquinas aumenta a plasticidade celular, promove a capacidade migratória e contribui para a progressão tumoral em diversas malignidades. Por exemplo, estudos em câncer de ovário mostraram que a diminuição da expressão de PLEC e PPL em tumores de alto grau coincide com a redução da estabilidade estrutural e mudança para um estado mais permissivo à invasão, mesmo na ausência de alterações evidentes nos marcadores de TEM. Essas observações sugerem que a perda de plaquinas pode representar desestabilização estrutural precoce, preparando as células tumorais para a migração ao enfraquecer a ancoragem epitelial.21 A análise da rede IPP dos membros da família das plaquinas no CCE revelou rede altamente interconectada composta por 246 nós e 8.258 arestas, com grau médio de nó de 67,1 e coeficiente de agrupamento de 0,692 (enriquecimento de IPP, p <1,0e‐16), destacando organização biologicamente significante. O enriquecimento de vias KEGG das proteínas sobrepostas destacou associações significantes com múltiplas vias relacionadas ao câncer, incluindo proteoglicanos (FDR <0,05). Esses resultados sugerem que as plaquinas funcionam não apenas como componentes estruturais, mas também podem participar de cascatas de sinalização do CCE que regulam o comportamento, a adesão e a migração das células tumorais. Evidências experimentais de células HeLa mostram que o knockdown de EPPK1 acelera a motilidade dos queratinócitos e induz rearranjos do citoesqueleto, enquanto a superexpressão suprime a motilidade.22

Entre as plaquinas, a EPPK1 se destaca por não apresentar repetições de espectrina nem um domínio de ligação à actina bem definido, e seu papel no câncer ainda é pouco compreendido.1,23 A pesquisa sobre a EPPK1 ainda é limitada, e seu envolvimento em neoplasias cutâneas ainda não foi totalmente elucidado. Estudos anteriores em CCE do esôfago relataram expressão de EPPK1 marcadamente elevada em comparação com controles normais, enquanto em adenocarcinomas colorretais, a expressão de EPPK1 estava diminuída, sugerindo papel dependente do contexto para essa proteína.10,12 Uma revisão recente sobre cânceres de cabeça e pescoço destacou que os componentes desmossômicos, incluindo as proteínas plaquinas, podem agir paradoxalmente, uma vez que sua expressão, localização e interações mudam dinamicamente durante a progressão do câncer.24 Da mesma maneira, embora a plectina seja frequentemente regulada positivamente em muitos tipos de tumores, sua regulação negativa foi relatada em certas malignidades, enfatizando padrão de expressão dual e ressaltando o papel fundamental das plaquinas na regulação da progressão tumoral, dependendo do contexto celular e tecidual.25 Essas observações sugerem que as consequências funcionais da expressão de EPPK1 podem variar de acordo com o contexto tecidual e o tipo de tumor, destacando a necessidade de mais investigações, particularmente em tumores cutâneos. Em cânceres cutâneos, níveis elevados de autoanticorpos anti‐BPAG1 no soro foram relatados em pacientes com melanoma em comparação com indivíduos saudáveis, indicando papel potencial, embora ainda incerto, das plaquinas como biomarcadores.2,3 No presente estudo, objetivou‐se avaliar sistematicamente a expressão imuno‐histoquímica de EPPK1 em nevos intradérmicos benignos, CBC e CCE para esclarecer seu papel potencial na biologia do tumor de pele. Os presentes achados demonstraram expressão significantemente maior de EPPK1 em CCE cutâneos (392,66±55,24) em comparação com CBC (70,39±15,32) e nevos intradérmicos benignos (27,08±3,82; p <0,05). Essa variação provavelmente reflete diferenças intrínsecas dependentes do tipo celular, visto que as células queratinocíticas do CCE apresentam arquitetura citoesquelética e características relacionadas à queratinização distintas em comparação com os CBC e lesões melanocíticas benignas, potencialmente contribuindo para a maior expressão de EPPK1. Dado esse padrão de expressão diferencial, a EPPK1 pode ter potencial utilidade diagnóstica em neoplasias cutâneas. Marcadores rotineiramente utilizados, como E‐caderina, p53 e certas metaloproteinases, têm sido sugeridos para auxiliar na diferenciação entre CCE e hiperplasia pseudocarcinomatosa. No entanto, uma limitação desses estudos foi que a expressão do marcador não foi analisada de acordo com o grau do tumor, e a diferenciação entre CCE bem diferenciado e hiperplasia pseudocarcinomatosa permaneceu um desafio.26 No presente estudo, a EPPK1 demonstrou padrão de expressão distinto em CCE de baixo a médio grau, sugerindo que ela pode fornecer valor diagnóstico adicional. Notavelmente, em regiões de CCE bem diferenciado, a imunorreatividade da E‐caderina permaneceu em grande parte nas junções intercelulares, enquanto a EPPK1 mostrou intensa expressão citoplasmática. Em áreas onde algumas células tumorais exibiram aumento da E‐caderina citoplasmática, a expressão de EPPK1 já estava disseminada, indicando que as alterações na EPPK1 podem preceder alterações detectáveis na localização da E‐caderina.

Na pele normal, a expressão de EPPK1 foi observada predominantemente nas camadas suprabasais da epiderme, com a imunorreatividade mais intensa localizada perto da camada granulosa, sugerindo papel na diferenciação tardia dos queratinócitos e na organização da barreira epidérmica. Em amostras de CCE, a expressão de EPPK1 foi particularmente proeminente em ninhos tumorais e mais intensa em células escamosas ao redor de pérolas de queratina. Essa distribuição espacial distinta pode indicar que a expressão de EPPK1 no CCE está associada a áreas de queratinização e diferenciação escamosa. Esses padrões espaciais estão alinhados com as descobertas de modelos epiteliais que mostram que os filamentos intermediários de queratina e as proteínas de ligação citoesquelética da família das plaquinas estabilizam cooperativamente as estruturas de superfície ricas em queratina, apoiando a ideia de que as plaquinas podem influenciar a dinâmica da queratinização em lesões epidérmicas humanas.27 Além da malignidade, a EPPK1 também foi implicada na regulação da barreira epitelial. Na psoríase, a EPPK1 é especificamente regulada negativamente de maneira dependente de interferon‐γ, e sua deficiência tem sido associada à adesão epitelial e à expressão prejudicadas de genes relacionados à barreira, apoiando o papel para a EPPK1 na manutenção da estabilidade epitelial.28 Consistente com esse conceito, no presente grupo de câncer de pele não melanoma, a expressão de EPPK1 mostrou correlação positiva significante com a E‐caderina, sugerindo que a EPPK1 pode estar funcionalmente ligada à dinâmica de adesão mediada por caderina em lesões epiteliais cutâneas.

Os membros da família das plaquinas podem exercer efeitos distintos e, às vezes, opostos na biologia tumoral. Notavelmente, a DSP exibe padrão consistente de supressão tumoral, com reduções acentuadas observadas em carcinomas orais e pulmonares. Essa perda tem sido associada a piores resultados clínicos, e dados experimentais demonstram que a depleção de DSP aumenta a proliferação de queratinócitos e ativa a sinalização pró‐sobrevivência de ERK/Akt, enquanto sua superexpressão suprime o crescimento de células de câncer de pulmão por meio da modulação de mediadores da via Wnt. Em contraste, a proteína relacionada à plaquina MACF1 exibe perfil mais oncogênico, e é altamente expressa em glioblastoma; seu knockdown reduz a proliferação e a migração, além de regular negativamente os componentes da via Wnt.23 Em relação à EPPK1, estudos anteriores em CCE esofágico relataram experimentos de knockdown funcional revelando reduções na proliferação, formação de colônias, migração e invasão celular.10 Do mesmo modo, em adenocarcinomas, como o câncer colorretal, a expressão de EPPK1 foi positivamente correlacionada com Ki67, sugerindo um papel na proliferação celular.12 Em consonância com esses achados, as presentes análises de enriquecimento funcional de GO demonstraram que a rede proteica compartilhada formada por membros da família das plaquinas no CCE estava predominantemente associada a processos relacionados à proliferação celular, incluindo “regulação da proliferação de células epiteliais”, “regulação positiva da proliferação da população celular” e “regulação da proliferação de fibroblastos”, todos enriquecidos com valores de FDR altamente significantes (FDR <0,05). Além da sinalização proliferativa, a rede também apresentou fortes associações com a organização do citoesqueleto, especialmente “organização do citoesqueleto de filamentos intermediários”, consistente com os papéis estruturais canônicos das plaquinas. Curiosamente, refletindo as funções duais e, por vezes, opostas conhecidas das proteínas plaquinas, a análise de GO revelou que as proteínas sobrepostas estavam enriquecidas tanto na regulação positiva quanto na negativa da adesão celular, destacando sua contribuição dependente do contexto para a estabilidade ou afrouxamento das junções. Além disso, o enriquecimento em “regulação positiva da migração celular” e processos ligados à sinalização apoptótica destaca possível envolvimento das plaquinas em vias que facilitam a motilidade e a sobrevivência das células tumorais durante a carcinogênese. No contexto do presente estudo, essas assinaturas funcionais orientaram a investigação da expressão de EPPK1 em neoplasias cutâneas, levando ao exame de suas associações com marcadores de TEM e espessura de Breslow para melhor compreender sua potencial contribuição para a progressão tumoral.

A TEM envolve a perda de junções célula‐célula e polaridade epitelial, incluindo junções aderentes. As caderinas, como moléculas de adesão, também podem atuar como mediadores de sinalização, influenciando comportamentos celulares como migração, proliferação, apoptose e diferenciação.29 Pogorzelska‐Dyrbuś et al. relataram expressões significantemente maiores de E‐caderina e N‐caderina em CCE, com níveis de N‐caderina significantemente elevados em comparação com CBC, o que foi associado a potencial metastático relativamente maior.30 De modo semelhante, Kim et al. observaram aumento na expressão de vimentina em CCE.31 No presente estudo, embora as amostras de CCE tenham apresentado níveis mais elevados de N‐caderina (216,37±59,83), a diferença em comparação com o CBC (139,61±45,47) não foi estatisticamente significante (p> 0,05), provavelmente em vitude da predominância de CCEs de baixo e médio grau nessa coorte. Suiqing et al. relataram que a expressão de E‐caderina é marcadamente menor em CCEs pouco diferenciados em comparação com tumores bem diferenciados.32 De maneira consistente, no presente estudo, a E‐caderina apresentou intensa imunorreatividade citoplasmática em casos de CCE (389,94±70,56, p <0,05). Na literatura, essa translocação de caderinas da membrana celular para o citoplasma é frequentemente interpretada como perda funcional dessas moléculas de adesão, potencialmente comprometendo a integridade celular e facilitando a transformação maligna e a metástase durante a TEM.29 Curiosamente, a EPPK1, que apresentou correlação positiva com a E‐caderina nas amostras de câncer de pele não melanoma no presente estudo, pode estar envolvida de maneira semelhante em processos celulares relacionados à TEM ou outros processos, incluindo a proliferação. Sua localização imunorreativa com expressão citoplasmática aumentada foi observada particularmente em ninhos de células escamosas ao redor de pérolas de queratina. A correlação positiva moderada entre a expressão de EPPK1 e a espessura de Breslow no CCE pode refletir, em parte, o aumento da queratinização e a formação mais proeminente de pérolas de queratina em tumores mais espessos, dada a associação estrutural da EPPK1 com a rede citoesquelética.

Em adenocarcinoma pulmonar, a redução da expressão de EPPK1 levou ao aumento da expressão de E‐caderina e à diminuição concomitante dos níveis de vimentina, sugerindo papel na modulação das características epiteliais‐mesenquimais.33 Em modelos de cicatrização de feridas epiteliais da córnea, a deficiência de EPPK1 foi associada à diminuição da expressão de E‐caderina, queratina‐6 e vimentina, indicando papel na regulação do citoesqueleto e potencialmente facilitando a migração celular durante o reparo tecidual.34 No presente estudo, a expressão de EPPK1 em cânceres de pele não melanoma mostrou forte correlação positiva com E‐caderina (r=0,565, p <0,001) e correlação positiva moderada com N‐caderina (r=0,329, p <0,05). Lopes et al. relataram correlação positiva entre N‐caderina e E‐caderina em melanoma, interpretada como estado TEM parcial com perfil de expressão de caderina híbrido.35 Venza et al. descobriram que a redução da E‐caderina no melanoma cutâneo não se correlacionava significantemente com o estágio clínico ou a espessura de Breslow, e sugeriram que sua regulação negativa pode estar mais intimamente associada à regulação da proliferação de células de melanoma.36 Nas amostras de câncer de pele não melanoma do presente estudo, a baixa correlação entre EPPK1 e N‐caderina, juntamente com a ausência de correlação significante com a espessura de Breslow, indica que a EPPK1 sozinha pode não servir como marcador de invasão confiável, embora possa desempenhar papel nos estágios iniciais da TEM.

Epidemiologicamente, os nevos intradérmicos são predominantemente observados em pacientes do sexo feminino, com 80,46% dos casos relatados em mulheres.37 Uma análise retrospectiva de casos diagnosticados entre 2010 e 2018 confirmou de modo semelhante essa predominância feminina, com 1.973 mulheres e 667 homens afetados.38 Em contraste, o CBC e o CCE afetam principalmente adultos mais velhos, com a idade de início mais frequente em torno de 70 a 85 anos.39 Especificamente, o CCE cutâneo geralmente se apresenta por volta dos 70 anos, com mais de 80% dos casos ocorrendo em indivíduos com 60 anos ou mais.40 De maneira consistente, no presente estudo, os grupos de CCE e CBC exibiram proporção maior de homens e idade média aumentada em comparação com o grupo de nevo intradérmico, refletindo tendências epidemiológicas conhecidas.

O presente estudo representa a primeira avaliação sistemática da expressão de EPPK1 no contexto da progressão da malignidade cutânea. Embora limitado por seu desenho retrospectivo, os achados fornecem informações valiosas sobre o papel potencial da EPPK1, particularmente em relação aos processos de TEM. Notavelmente, a expressão de EPPK1 foi significantemente maior no CCE bem diferenciado em comparação com o CBC e nevos intradérmicos benignos, e demonstrou correlação positiva com a E‐caderina, sugerindo um papel na dinâmica da TEM e potencialmente em outros processos iniciais relacionados ao tumor.

Em conclusão, a EPPK1 parece atuar como molécula dependente do contexto associada à TEM, mostrando expressão elevada no CCE queratinocítico. Seu padrão de expressão diferencial e correlação com marcadores de adesão importantes destacam sua potencial utilidade como biomarcador diagnóstico para neoplasias cutâneas. Estudos futuros com coortes maiores, incluindo CCE de alto grau, são necessários para esclarecer ainda mais o significado prognóstico da EPPK1.

A aprovação ética foi obtida junto ao Comitê de Ética da Universidade Bilecik (número de aprovação: 2025/7‐12, data: 04 de agosto de 2025). Todos os métodos foram conduzidos de acordo com os padrões éticos do Comitê de Pesquisa institucional e com a Declaração de Helsinque.

O consentimento informado formal por escrito não foi exigido em virtude do desenho retrospectivo do estudo, conforme dispensado pelo Comitê de Ética competente.

Özlem Türelik: 0000‐0001‐6057‐9171

Nenhum.

Damla Gül Fındık: Concepção e planejamento do estudo; obtenção, análise e interpretação dos dados; análise estatística; elaboração e redação do manuscrito; aprovação da versão final do manuscrito.

Özlem Türelik: Obtenção, análise e interpretação dos dados; elaboração e redação do manuscrito; aprovação da versão final do manuscrito.

Todo o conjunto de dados que dá suporte aos resultados deste estudo foi publicado no próprio artigo.

Nenhum.

Neusa Yuriko Sakai Valente